司法部發(fā)布2016版血液中乙醇的測定頂空氣相色譜法
SF/Z JD代替SF/Z JD
血液中乙醇的測定
頂空氣相色譜法
1 范圍
本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了血液中乙醇的頂空氣相色譜測定方法。
本技術(shù)規(guī)范適用于血液中乙醇的定性及定量分析。
本技術(shù)規(guī)范的方法檢出限為0.01mg/mL；定量下限為0.05mg/mL。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件對于本技術(shù)規(guī)范的應(yīng)用是*的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本技術(shù)規(guī)范。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規(guī)范。
GB/T 6682  分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）
GA/T 122  毒物分析名詞術(shù)語
3 原理
本法利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測器進(jìn)行檢測，經(jīng)與平行操作的乙醇對照品比較，以保留時(shí)間進(jìn)行定性分析；以峰面積為依據(jù)，用內(nèi)標(biāo)法定量。
4 試劑和材料
除另有說明外，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。
4.1 乙醇
色譜純。
4.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液
精密稱取適量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。儲備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。試驗(yàn)中所用其它濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液均從上述儲備液稀釋而得，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為3個(gè)月。
4.3 叔丁醇
色譜純。
4.4 叔丁醇溶液
精密稱取適量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇儲備液。儲備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為12個(gè)月。將儲備液用水稀釋，得40.0μg/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。
5 儀器 
5.1 氣相色譜儀
配火焰離子化檢測器（FID）。
5.2 頂空進(jìn)樣器
配1mL定量進(jìn)樣環(huán)。
5.3 樣品瓶
10mL，頂空自動(dòng)進(jìn)樣器用。
5.4 硅橡膠墊
5.5 鋁帽
5.6 密封鉗
5.7 精密移液器
5.8 自動(dòng)稀釋儀
6 測定步驟
6.1 樣品處理
用精密移液器或自動(dòng)稀釋儀取待測血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，加入樣品瓶內(nèi)，蓋上硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻。
6.2 測定
6.2.1 頂空氣相色譜測定參考條件
a） 色譜柱（1）：DB-ALC1（30m0.32mm1.8m）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；
柱溫：恒溫40C； 
色譜柱（2）：DB-ALC2（30m0.32mm1.2m）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；
柱溫：恒溫40C；
b） 載氣：氮?dú)?，純?ge;99.999%，流速8mL/min；
c） 進(jìn)樣口溫度：150C；
d） 檢測器溫度：250C；
e） 加熱箱溫度：65C；
f） 定量環(huán)溫度：105C；
g） 傳輸線溫度：110C；
h） 氣相循環(huán)時(shí)間：3.5min；
i） 樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10.0min；
j） 樣品瓶加壓時(shí)間：0.10min；
k） 定量環(huán)充滿時(shí)間：0.10min；
l） 定量環(huán)平衡時(shí)間：0.05min；
m） 進(jìn)樣時(shí)間：1.00min。
6.2.2 定性測定
樣品溶液按照頂空氣相色譜測定條件測定，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，記錄色譜峰的保留時(shí)間。將待測樣品色譜峰的保留時(shí)間與乙醇標(biāo)準(zhǔn)對照品的保留時(shí)間比較，相對誤差在2%內(nèi)，空白對照樣品內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常而無乙醇的色譜峰，一般可以認(rèn)為待測樣品中含有乙醇；必要時(shí)，選擇不同的色譜條件或用氣相色譜-質(zhì)譜法確證。如果內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常，而無乙醇的色譜峰時(shí)，可認(rèn)為檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。乙醇對照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，參見附錄A。
6.2.3 定量測定
本方法采用內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法或內(nèi)標(biāo)法－單點(diǎn)校正法定量測定。
6.2.3.1  內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法
采用內(nèi)標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法測定（見附錄B）。將乙醇對照品溶液進(jìn)樣，以乙醇和內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，乙醇對照品工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對待測樣品進(jìn)行定量，所測樣品中乙醇的濃度值應(yīng)在線性范圍內(nèi)。
6.2.3.2  內(nèi)標(biāo)法－單點(diǎn)校正法
待測血液樣品乙醇濃度在標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的±30%內(nèi)可用單點(diǎn)法定量。
6.3 平行試驗(yàn)
按以上步驟對同一待測樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)。
單柱單檢測器兩份樣品測定結(jié)果按兩份樣品的平均值計(jì)算，雙樣相對相差不得超過10％。雙樣相對相差按式（1）計(jì)算：
                                    | C1 - C2|
雙樣相對相差（%） =   100     ………………………………（1）
                                      C

式中：
C1、C2兩份樣品平行定量測定的結(jié)果；
C 兩份樣品平行定量測定結(jié)果的平均值(C1+C2)/2。
雙柱雙檢測器兩份樣品測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）若不超過5％時(shí)，結(jié)果按兩份樣品結(jié)果的平均值計(jì)算。
7 結(jié)果計(jì)算
血液中乙醇濃度測定采用內(nèi)標(biāo)法－校準(zhǔn)曲線法定量或按式(2)計(jì)算：
                                 A Ai′c          
                   C =          …………………………………（2）
                                  A′Ai             

式中：
C血液樣品中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)；
A血液樣品中乙醇的峰面積；
A′標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇的峰面積；
Ai′標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；
Ai血液樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；
c標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)。

附錄A
（資料性附錄）
乙醇對照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖
A.1 按色譜柱（1）條件得乙醇對照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見圖A.1。

A.2 按色譜柱（2）條件得乙醇對照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見圖A.2。

附錄B
（資料性附錄）
校準(zhǔn)曲線
配制乙醇濃度為0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL的水溶液，按6.1和6.2項(xiàng)下分析，每一濃度點(diǎn)取2份，以乙醇與內(nèi)標(biāo)叔丁醇的峰面積比對乙醇濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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