國(guó)產(chǎn)便捷式液相色譜儀在藥物分析領(lǐng)域的幾個(gè)應(yīng)用：

化學(xué)藥品的分析

在針對(duì)藥物合成的分析方面, UPLC 可實(shí)現(xiàn)隨時(shí)快速準(zhǔn)確檢測(cè)合成過(guò)程中的中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。

生化藥品的分析

利用HPLC和UPLC 分析經(jīng)柱前衍生化處理后的蛋白質(zhì)水解物中氨基酸。結(jié)果表明, 兩種方法的結(jié)果基本一致, 但UPLC的分析時(shí)間僅為HPLC 的40% 。

中藥成分的分析

中藥含有大量的生物堿, 通常為中藥的活性成分, 研究這類(lèi)成分具有重要意義。在采用HPLC 法分析生物堿時(shí), 由于固定相表面殘余硅羥基的影響, 此類(lèi)化合物色譜峰的保留行為會(huì)發(fā)生變化, 造成色譜峰嚴(yán)重展寬和拖尾, 因而在分析時(shí)常需要在流動(dòng)相中加入添加劑, 如離子對(duì)試劑、有機(jī)胺類(lèi)等,用以屏蔽固定相表面殘余硅羥基的作用, 但這些添加劑的加入往往會(huì)給LC- MS 聯(lián)用帶來(lái)不便。部分 UPLC 填料, 減少了固定相表面殘余硅羥基, 因而在分析生物堿類(lèi)樣品時(shí), 流動(dòng)相中只加入酸抑制劑, 不需添加有機(jī)胺即可使其獲得良好的分離。由于在流動(dòng)相中避免了有機(jī)胺及鹽的加入, 可以在一定程度上降低質(zhì)譜噪音、減少對(duì)質(zhì)譜的污染, 且使用的流速適合與質(zhì)譜直接聯(lián)用, 無(wú)需分流, 可以進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度。

藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究

藥物代謝動(dòng)力學(xué)涉及藥物在肌體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程的研究, 包括藥物及其在各種復(fù)雜基質(zhì)(全血、血漿、尿、膽汁及生物組織)中代謝物的分離、結(jié)構(gòu)鑒定以及痕量分析測(cè)定。肌體的體液系統(tǒng)中存在大量的保留時(shí)間相同、相對(duì)分子質(zhì)量也相同的干擾組分; 而目前藥物研制日趨低劑量, 使常規(guī)的分離檢測(cè)技術(shù)難以滿(mǎn)足復(fù)雜介質(zhì)中痕量成分準(zhǔn)確定量的要求。能否在復(fù)雜的體液系統(tǒng)中快速檢測(cè)和鑒定出藥物的代謝產(chǎn)物, 依賴(lài)于的色譜分離和靈敏的高分辨質(zhì)譜技術(shù)的聯(lián)用。采用UPLC - MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行藥物代謝及藥物動(dòng)力學(xué)研究, 體現(xiàn)了其高靈敏度和高專(zhuān)屬性特點(diǎn), 而且能夠同時(shí)測(cè)定樣品中復(fù)方制劑的多組分濃度, 實(shí)現(xiàn)樣品高通量分析。

國(guó)產(chǎn)便捷式液相色譜儀的局限性

1、與國(guó)產(chǎn)便捷式液相色譜儀匹配的色譜柱比較少

UPLC 是應(yīng)小粒徑(小于2μm )柱填料的需求而專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的耐高壓液相色譜系統(tǒng), 因此使用小粒填料的色譜柱能夠大限度地發(fā)揮UPLC 高分離度和高靈敏度的優(yōu)勢(shì)。但是這種色譜柱要能夠耐受由于粒徑減小而帶來(lái)的高反壓,而且粒徑的減小也給色譜柱充填技術(shù)帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

2、峰面積的重復(fù)性欠佳

UPLC分析樣品時(shí)峰面積的重復(fù)性略遜于HPLC, 特別是低濃度樣品時(shí)更加明顯, 其峰面積重復(fù)性的RSD 約為HPLC的2倍。研究者認(rèn)為, 可能因UPLC的進(jìn)樣量過(guò)少(僅有2μl) , 或者由于采用了半環(huán)( partia l loop)進(jìn)樣的方式, 理論上這種進(jìn)樣方式的精密度不如全環(huán)( fuIl lop)進(jìn)樣。通過(guò)稀釋樣品, 增加注入樣品的體積,可以改善這種狀況。

3、對(duì)高頻檢測(cè)儀器的需要

UPLC分離樣品色譜峰擴(kuò)展很小, 通常峰底寬度只有幾秒鐘, 低濃度的樣品峰則更窄。使用UPLC 測(cè)定低濃度樣品時(shí), 準(zhǔn)確度、精密度都比較差。這可能是由于檢測(cè)儀器探測(cè)頻率比較低, 檢測(cè)低濃度樣品時(shí)出現(xiàn)了樣品點(diǎn)的遺漏。因此, 隨著UPLC 的開(kāi)發(fā)應(yīng)用, 必將推動(dòng)高頻檢測(cè)儀器的進(jìn)一步發(fā)展。